1971年Engvall和Perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）用于IgG定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標抗體技術發(fā)展成液體標本中微量物質(zhì)的測定方法。這一方法的基本原理是：①使抗原或抗體結合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體，這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測定時，把受檢標本（測定其中的抗體或抗原）和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其他物質(zhì)分開，最后結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關，故可根據(jù)顏色反應的深淺有無定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，故可極大地放大反應效果，從而使測定方法達到很高的敏感度。

常用的ELISA可以分為以下五大類：①直接ELISA；②間接ELISA；③夾心ELISA；④競爭ELISA；⑤競爭抑制ELISA。其他的ELISA都隸屬于這五類ELISA或由這五類ELISA組合衍生。 [2]

其方法是將抗原按一定的比例稀釋好包被到固相載體上，然后加入稀釋好的特異性的酶標抗體，孵育后加入底物顯色并判讀結果。直接ELISA操作很簡單，步驟也比較簡練，但是其應用范圍還是非常有限的，一個重要的原因是這種ELISA中只經(jīng)過了一步信號放大（酶的放大），所以其靈敏度不是很高；另外，其測定的對象也非常有限，只能測定酶標記的分子。

間接ELISA與直接ELISA不同的是，間接ELISA中與包被好的抗原結合的是非酶標抗體，另外再引入第二種抗體（即二抗）。二抗是經(jīng)過酶標的，它可以與第一種抗體特異性結合，最后加入底物顯色并判讀結果。由于二抗一般為多抗，因此，一個一抗分子上可以結合多個二抗分子，同時，一個二抗分子上可以標記上多個酶分子，所以當待測抗體為多抗時，信號經(jīng)過兩步放大，最終提高了檢測的靈敏度。另外，由于二抗制備比較容易，而且很早就開始商品化，所以操作者無需要將一抗進行酶標，大大縮減了工作量。在檢測抗體的效價、血清的效價以及單克隆抗體的篩選過程中，間接ELISA都是非常重要的實驗過程，在臨床診斷中，間接ELISA也是檢測標志性抗體的重要手段。

夾心ELISA總體上可以分為兩種，直接夾心ELISA和間接夾心ELISA。

直接夾心ELISA又分為雙抗體夾心ELISA和雙抗原夾心ELISA。

雙抗體夾心ELISA的方法是將第一種抗體（捕獲抗體）包被在固相載體上，封閉后加入待檢抗原，溫育后加入第二種抗體（檢測抗體），捕獲抗體和檢測抗體可以是針對不同表位的兩種單抗，也可以是針對同一抗原的一種單抗與一種多抗，但是檢測抗體需要經(jīng)過酶標。

雙抗原夾心ELISA的原理和操作與雙抗體夾心ELISA基本相同，不同的是包被的是抗原，待檢對象是抗體，然后加入酶標抗原，再加底物顯色。

對于雙抗體夾心ELISA，待檢對象必須包括兩個或者兩個以上的表位，否則檢測抗體無法與待檢抗原結合，例如半抗原和小分子抗原都是不能用雙抗體夾心ELISA檢測的。對于雙抗原夾心ELISA，其操作與間接ELISA基本相同，但利用特異性的抗原代替酶標二抗，所以特異性比間接法更好。另外，由于間接ELISA中使用的二抗一般只能識別IgG，而雙抗原夾心ELISA中任何類似的免疫球蛋白都可以被檢測出，因此，雙抗原夾心ELISA比間接ELISA也更靈敏。

間接夾心ELISA是基于兩種不同種屬來源的抗體的夾心ELISA，其原理是將一種種屬來源的特異性抗體包被于固相載體上（作為捕獲抗體），封閉，加入待檢抗原，溫育，洗滌后加入另一種種屬來源的特異性抗體（非酶標，作為檢測抗體），最后加入酶標二抗（特異性識別檢測抗體），再加底物顯色。與直接雙抗夾心ELISA相比，間接夾心ELISA中引入了特異性識別檢測抗體的酶標二抗，相當于整個體系的信號增加了一步放大系統(tǒng)，于是最終的結果比直接雙抗夾心ELISA更靈敏。同時，由于間接夾心ELISA中的酶標二抗僅能識別檢測抗體，而不能識別捕獲抗體，所以體系的特異性也得到了保障。

本法首先將特異性抗體吸附于固相載體表面，經(jīng)洗滌后分成兩組：一組加酶標記抗原和被測抗原的混合液；而另一組只加酶標記抗原，再經(jīng)孵育洗滌后加底物顯色，這兩組底物降解量之差，即為所要測定的未知抗原的量。這種方法所測定的抗原只要有一個結合部位即可，因此，對小分子抗原如激素和藥物之類的測定常用此法。